食品中合成着色剂最新的测定方法液相色谱

摘自粮油食品科技,,29(3):-.

食品中合成着色剂最新的测定方法，液相色谱–串联质谱法测定谷类食品中合成着色剂：使用了食用小苏打

摘要：通过添加食用小苏打的甲醇水溶液提取谷类食品中的合成着色剂，采用超高效液相色谱–串联质谱技术测定加标回收率，考察食用小苏打在谷类食品中对日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红和亮蓝五种合成着色剂的萃取效果。

1试验材料

小米、发糕、玉米窝头、荞麦挂面、玉米片、玉米糁子、食用小苏打，异丙醇、甲酸（色谱级）、氨水（分析纯）、乙酸铵（优级纯）、吐温20（化学纯）、丙三醇、1,2-丙二醇（分析纯），标准品日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红和亮蓝（0.50mg/mL）。

2仪器设备

AgilentInfinityII液相色谱-三重四极杆质谱联用仪，配有ESI离子源：美国Agilent公司；HUK-超声波清洗器：天津恒奥；

HMG-D24氮吹仪：北京华安麦科生物技术有限公司；

GL-20G-C高速冷冻离心机：上海安亭科学仪器厂；

RV10Control旋转蒸发仪：德国IKA公司；

QL-旋涡混合器：海门市其林贝尔仪器制造有限公司；

Perten实验磨：瑞典波通仪器公司。

3试验方法

3.1样品中色素的提取：采用锤式旋风磨将干燥后的样品粉碎至细度为目的粉末状样品。称取样品5.00g于离心管中，添加1.00g食用小苏打作为辅助提取剂，加入30mL40%的甲醇水溶液，涡旋混合提取5min，提取完毕后在r/min条件下离心5min，收集上清液，重复提取3次，将收集的上清液合并混匀。

1)提取试剂优化：取六份玉米粉各5.0g，按1:6的比例加入提取液，添加1.0g小苏打作为辅助提取试剂，V（甲醇）/V（氨水）=40∶60为提取试剂，提取后测定加标回收率。小苏打可以充分提取合成着色剂，可使合成着色剂高效富集在固相萃取柱表面。

2)小苏打的添加量：取六份玉米粉各5.0g，按1∶6的比例加入提取液，添加小苏打量为1.0g，提取后测定加标回收率。考虑经济效益及检测结果的准确性，选取最优小苏打添加量为1.0g，在合成着色剂的提取过程中适量加入食用小苏打有助于合成着色剂分布于提取溶液中。

3)pH值对净化工艺的影响，酸性环境（pH值=2.6），即净化柱活化后用2%甲酸水平衡，保持酸性环境。在酸性环境中使用StrataX-AWSPE净化样品，加标回收率高。

3.2提取液的固相萃取柱净化：先后加1mL甲醇、1mL水活化固相萃取柱StrataX-AWSPE，在加1mL2%甲酸水溶液平衡净化柱，滤液均弃去；取1mL样品提取液加入净化柱，弃去滤液；加入1mL2%甲酸水溶液淋洗固相萃取柱，弃去滤液，将小柱抽干。加1mL25%氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱，控制流速，确保洗脱液逐滴下落，收集洗脱液；将收集的洗脱液采用氮吹方式吹干；用1mL的去离子水复溶，涡旋混合1min，待样品充分溶解，将样品溶液过0.22μm亲水性针式过滤器，待上机分析。

3.3标准曲线的制作：配制10μg/mL的单一标准储备液，4°C冰箱保存。日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红和亮蓝分别取10、20、40、60、80、、、μL于2mL样品瓶，用去离子水定容配制成混标溶液，配制浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4μg/mL的系列梯度溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤后进行色谱分析。

3.4方法精密度：将mg/mL的5种合成着色剂标准混合溶液用方法(HPLC-MS/MS分析条件)连续进样6次，根据测定量计算其相对标准偏差（RSD）。

3.5加标回收率：为了评价方法的准确度，进行了添加回收率实验。选择小米、玉米糁子、发糕、玉米窝头、荞麦挂面五种不同基质的食物样品，加入日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红和亮蓝5种待研究的合成着色剂，加标水平分别为1、2和10μg/g，每个加标水平分别进行6个平行试验。

在40%的甲醇水溶液里添加食用小苏打，可以有效提取谷物加工品中的合成着色剂，解决了淀粉含量高而合成着色剂不易检出的技术难题。具有较高的加标回收率，适用于液相色谱仪和液相色谱质谱仪同时淀粉含量高的谷物食品中合成着色剂的测定，为合成色素检测时的前处理过程提供了一种参考方法。

参考文献：

DOI:10./j.cnki.7-..03.张春娥,廖若宇,孙悦,等.液相色谱–串联质谱法测定谷类食品中5种合成着色剂[J].粮油食品科技,,29(3):-.ZHANGCE,LIAORY,SUNY,etal.Determinationoffivesyntheticcolorantsingrainfoodbyhighperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrum[J].ScienceandTechnologyofCereals,OilsandFoods,,29(3):-.